एंटीजन और एंटीबॉडी के लिए इलेक्ट्रोमिमुनोडिफ्यूजन तकनीकों के 2 तरीके
इम्युनोडिफ़्यूजन तकनीकों में, एंटीजन और एंटीबॉडी को प्रीसिपिटिन लाइन बनाने के लिए फैलाने की अनुमति दी जाती है और इसमें अधिक समय (24-72 घंटे) लगता है।
यदि एंटीजन और / या एंटीबॉडी की गति तेज हो जाती है, तो प्रीस्पिटिन लाइन बहुत कम समय में बनेगी ताकि निदान जल्दी हो सके। यह लक्ष्य विद्युत रूप से प्रतिजन और एंटीबॉडी को स्थानांतरित करके प्राप्त किया जाता है। इस सिद्धांत के कई रूप हैं। उपयोग में आने वाली दो सामान्य विधियाँ हैं प्रतिघातक इम्युनोएलेक्ट्रोफोरेसिस और लॉरेल की रॉकेट वैद्युतकणसंचलन।
काउंटरक्रोन्ट इम्यूनोलेरोफोरेसिस (एक आयामी डबल इलेक्ट्रोइम्यूनोडिफ्यूजन):
एक स्लाइड पर अगर में दो कुओं को काट दिया जाता है।
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एक कुआं एंटीजन से भरा होता है और दूसरा कुआं एंटीबॉडी से भरा होता है।
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आगर का एंटीबॉडी पक्ष एनोड से जुड़ा हुआ है और एंटीजन पक्ष इलेक्ट्रोफोरेसिस तंत्र के कैथोड से जुड़ा हुआ है।
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बिजली के आवेदन पर, बिजली के प्रभाव में अगर में एंटीजन और एंटीबॉडी अणु चलते हैं (उनके विद्युत आवेशों के कारण)।
एक क्षारीय बफ़र में, अधिकांश नैदानिक रूप से महत्वपूर्ण एंटीजन इलेक्ट्रोनगेटिव होते हैं और इसलिए वे एनोड की ओर बढ़ते हैं (यानी, एंटीबॉडी की ओर)। एंटीबॉडी अणु विद्युत रूप से तटस्थ या कमजोर रूप से नकारात्मक होते हैं। आम तौर पर विद्युत नकारात्मक एंटीबॉडी अणुओं को एनोड की ओर बढ़ना चाहिए।
लेकिन वैद्युतकणसंचलन के दौरान अगर में हाइड्रोनियम आयनों की गति बहुत मजबूत होती है और कैथोड की ओर कमजोर नकारात्मक एंटीबॉडी अणुओं को खींचती है (अर्थात, प्रतिजन कुएं की ओर)। चूंकि एंटीजन और एंटीबॉडी अणु विपरीत दिशाओं में आगे बढ़ रहे हैं, वे एक-दूसरे से मिलते हैं और दोनों कुओं के बीच में एक प्रीस्पिटिन लाइन बनाते हैं। प्रीस्पिटिन लाइन 30 मिनट में दिखाई देती है (प्रसार में 24 घंटे के विपरीत) और प्रसार की तुलना में लगभग 10 गुना अधिक संवेदनशील होती है।
काउंटरक्रंट इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस का पता लगाने के लिए उपयोग किया जाता है
ए। मस्तिष्कशोथ द्रव में मेनिंगोकोकल, क्रिप्टोकॉकल और हीमोफिलिक एंटीजन और
ख। सीरम में हेपेटाइटिस बी सतह प्रतिजन।
लॉरेन के रॉकेट वैद्युतकणसंचलन (एक आयामी एकल इलेक्ट्रोइम्यूनोडिफ्यूजन):
इस तकनीक का उपयोग एंटीजन को परिमाणित करने के लिए किया जाता है। एंटीबॉडी को पिघला हुआ अगर के साथ मिलाया जाता है और कांच की स्लाइड पर डाला जाता है। जमने के बाद, कुओं को काट दिया जाता है और एंटीजन की विभिन्न सांद्रता से भर जाता है।
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जब बिजली लागू की जाती है, तो एंटीजन एंटीबॉडी युक्त अगर में चला जाता है। एंटीजन की चलती सीमा के पार्श्व मार्जिन के साथ प्रीसिपिटिन लाइनें बनाई जाती हैं। धीरे-धीरे, एंटीजन को वर्षा से खो दिया जाता है, ताकि अग्रणी किनारे पर इसकी एकाग्रता कम हो जाए और पार्श्व मार्जिन एक तेज बिंदु बनाने के लिए परिवर्तित हो। इस प्रकार वर्षा का परिणामी पैटर्न स्पाइक या रॉकेट जैसा दिखता है।
प्रतिजन कुएं से स्पाइक की दूरी प्रतिजन एकाग्रता में वृद्धि के साथ बढ़ जाती है। एंटीजन की ज्ञात सांद्रता का उपयोग करके एक मानक वक्र स्थापित किया जा सकता है। एक परीक्षण प्रतिजन की एकाग्रता का गठन रॉकेट की दूरी के साथ मानक वक्र के प्रक्षेप द्वारा निर्धारित किया जा सकता है।
इस तकनीक की संवेदनशीलता लगभग 0.5 मिलीग्राम / एमएल है। लॉरेल तकनीक का उपयोग मस्तिष्कमेरु द्रव (सीएसएफ) में क्रिप्टोकोकस, मेनिंगोकोकस और हीमोफिलस के प्रतिजनों का पता लगाने के लिए भी किया जाता है।
