3 एग्लूटीनेशन तकनीक का वर्गीकरण
तीन प्रकार जिनमें कोशिकाओं की एग्लूटीनेशन तकनीकों को वर्गीकृत किया जाता है, वे हैं: 1. प्रत्यक्ष एग्लूटिनेशन, 2. अप्रत्यक्ष (निष्क्रिय) एग्लूटिनेशन और 3. रिवर्स (निष्क्रिय) एग्लूटिनेशन।
1. डायरेक्ट एग्लूटिनेशन टेस्ट:
कोशिकाएं (जैसे बैक्टीरिया, कवक, और एरिथ्रोसाइट्स) और अघुलनशील कण एंटीजन उनके विशिष्ट एंटीबॉडी द्वारा सीधे उत्तेजित हो सकते हैं। एंटीबॉडी में दो फैब हथियार होते हैं, जिसके साथ यह दो कोशिकाओं पर एंटीजन को बांध सकता है। इसी तरह कई एंटीबॉडी अणुओं को जाली बनाने के लिए कई कोशिकाओं के साथ बांधते हैं।
इस जाली के गठन को क्लंप के रूप में देखा जाता है। इसलिए, थक्कों का निर्माण प्रतिजन-एंटीबॉडी बंधन की उपस्थिति को इंगित करता है। एग्लूटिनेशन का अभाव एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया की अनुपस्थिति को इंगित करता है।
डायरेक्ट एग्लूटिनेशन टेस्ट के उपयोग:
ए। रोगाणुओं की पहचान:
संस्कृति मीडिया में विकसित बैक्टीरिया कालोनियों को रोगाणुओं के खिलाफ ज्ञात एंटीसेरा का उपयोग करके पहचाना जाता है। रोगाणुरोधी एंटिसेरियम जो दृश्यमान एग्लूटीनेशन पैदा करता है वह बैक्टीरिया की पहचान करता है।
ख। सीरम में रोगाणुओं के खिलाफ एंटीबॉडी की उपस्थिति का पता लगाकर माइक्रोबियल संक्रमण का निदान। ज्ञात माइक्रोबियल एंटीजन रोगी के सीरम के साथ मिश्रित होते हैं और एग्लूटिनेशन की घटना माइक्रोब के खिलाफ सीरम एंटीबॉडी की उपस्थिति को इंगित करती है।
सी। मानव एरिथ्रोसाइट्स (एंटीसेरा का उपयोग करके) के एबीओ रक्त समूहन।
एग्लूटीनेशन टेस्ट या तो स्लाइड (स्लाइड एग्लूटिनेशन टेस्ट) या ट्यूब्स (ट्यूब एग्लूटिनेशन टेस्ट) में किया जाता है।
मैं। स्लाइड एग्लूटीनेशन टेस्ट सरल और आसान है और इसे टेस्ट करने के लिए केवल कुछ मिनटों की आवश्यकता होती है।
ii। ट्यूब एग्लूटीनेशन टेस्ट का उपयोग सीरम एंटीबॉडी की मात्रा को सीरम को धीरे-धीरे सीरम को पतला करके और फिर माइक्रोबियल एंटीजन की निरंतर मात्रा के साथ पतला सीरा को मिलाकर किया जाता है। उचित ऊष्मायन के बाद दृश्यमान एग्लूटिनेशन दिखाने वाले सीरम के उच्चतम कमजोर पड़ने को सीरम के टिटर के रूप में लिया जाता है (उदाहरण के लिए, विडाल ट्यूब टेस्ट, ब्रुसेला ट्यूब टेस्ट)। टिटर सीरम में एंटीबॉडी की एकाग्रता को दर्शाता है; अधिक टिटर, अधिक एंटीबॉडी की सांद्रता है।
संक्रामक एजेंटों के खिलाफ सीरम एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए स्लाइड परीक्षण का उपयोग प्रारंभिक जांच परीक्षणों के रूप में किया जाता है। पॉजिटिव स्लाइड टेस्ट के सीरा को स्लाइड टेस्ट के परिणामों की पुष्टि के लिए ट्यूब टेस्ट द्वारा रिटायर किया जाना चाहिए। स्लाइड परीक्षण भ्रामक परिणाम दे सकता है, विशेष रूप से बहुत उच्च सीरम एंटीबॉडी स्तर (जैसे, ब्रुसेला एंटीबॉडी के साथ प्रोजोन घटना)।
एग्लूटिनेशन टेस्ट सिस्टम में बहुत आंतरिक परिवर्तनशीलता है। इसलिए, जब किसी रोगी के सीरम टिटर के मान को दो अवसरों पर जांचा जाता है, तो टिटर के मूल्यों के बीच का अंतर महत्वपूर्ण होता है, केवल तब जब टिटर का मान कम से कम दो डबल dilutions [या अंतर दो ट्यूबों (पहले मूल्य का चार गुना) से भिन्न होता है ] (जैसे। विडाल ट्यूब टेस्ट में, सीरम दो परतों में पतला होता है: 1 में 20, 1 में 40, 1 में 80, 1 में 160, 1 में 320, और 1 में 640। यदि किसी मरीज का पहला विडाल टेस्ट है 160 में 1 का टिटर, दूसरा विडाल टेस्ट टिटर महत्वपूर्ण है यदि यह 640 में 1 या 640 में 1 से अधिक है।)
हिटरोफाइल एंटीबॉडी परीक्षण:
(अक्सर मोनो-स्पॉट परीक्षण के रूप में जाना जाता है) हेटेरोफाइल एंटीबॉडी परीक्षण एपस्टीन बर्र (ईबी) वायरस के खिलाफ एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए एक हीमोग्लूटीनेशन परीक्षण है जो संक्रामक मोनोन्यूक्लिओसिस रोग का कारण बनता है। संक्रामक मोनोन्यूक्लिओसिस क्रॉस के दौरान गठित आईजीएम एंटीबॉडी बराबर आरबीसी सतह प्रतिजनों (शायद ईबी वायरस और इक्वाइन आरबीसी सतह प्रोटीन के बीच एंटीजेनिक समानता के कारण) के साथ प्रतिक्रिया करते हैं और रक्तस्राव का कारण बनते हैं।
अप्रत्यक्ष (निष्क्रिय) एग्लूटिनेशन टेस्ट:
अप्रत्यक्ष एग्लूटिनेशन टेस्ट में, ज्ञात घुलनशील एंटीजन को अन्य कोशिकाओं (जैसे, भेड़ या टर्की एरिथ्रोसाइट्स) या अक्रिय कणों (जैसे, लेटेक्स, बेंटोनाइट, चारकोल, पॉलीस्टाइन) पर लेपित किया जाता है, जो एंटीजन के निष्क्रिय वाहक के रूप में कार्य करते हैं।
कई एंटीजन को सीधे एरिथ्रोसाइट्स पर लेपित किया जा सकता है या फॉर्मेलिन, टैनिक एसिड या ग्लूटाराल्डली के साथ एरिथ्रोसाइट्स का इलाज करने के बाद। कोटिंग के लिए एरिथ्रोसाइट्स का उपयोग करने के फायदे उनकी आसान उपलब्धता और भंडारण क्षमता हैं। इसके अलावा ये परीक्षण अत्यधिक संवेदनशील हैं।
टेस्ट सीरम को ज्ञात एंटीजन कोटेड एरिथ्रोसाइट्स या लेटेक्स के साथ मिलाया जाता है।
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यदि परीक्षण सीरम में एंटीबॉडी होते हैं, तो एरिथ्रोसाइट्स या लेटेक्स कण दिखाई देते हैं और दिखाई देने वाले थक्कों का उत्पादन करते हैं।
रक्तगुल्म परख:
रक्तगुल्म परीक्षण सरल और प्रदर्शन करने में आसान हैं। दोनों गुणात्मक और मात्रात्मक परीक्षण हेमग्लूटीनेशन तकनीक के साथ किए जा सकते हैं।
परीक्षण सीरम सूक्ष्म रूप से एक माइक्रोटिटर प्लेट कुओं में एक मंद समाधान में पतला होता है।
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एक ज्ञात एंटीजन के साथ लेपित आरबीसी को सभी कुओं के बराबर मात्रा में जोड़ा जाता है। उपयुक्त सकारात्मक नियंत्रण, नकारात्मक नियंत्रण और अभिकर्मक नियंत्रण का उपयोग किया जाता है। प्लेट को अच्छी तरह से हिलाया जाता है और कंपन से मुक्त स्थान पर लगाया जाता है।
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ऊष्मायन के बाद, प्लेट को एग्लूटिनेशन के लिए नग्न आंखों से पढ़ा जाता है।
सकारात्मक प्रतिक्रिया:
एग्लूटिनेशन वाले वेल्स टेस्ट सीरम में संबंधित एंटीबॉडी के साथ एंटीजन कोटेड आरबीसी के बंधन को इंगित करते हैं। एग्लूटिनेटेड कुएं के निचले हिस्से को कालीन के रूप में वर्णित किया गया है।
नकारात्मक प्रतिक्रिया:
जिन कुओं में एंटीजन-एंटीबॉडी बाइंडिंग नहीं है, वहां आरबीसी का एग्लूटीनेशन नहीं होता है। गुरुत्वाकर्षण के कारण, आरबीसी कुओं के तल पर बस जाते हैं और "बटन" जैसी उपस्थिति देते हैं, जिसमें "बटन" का किनारा तेज और नियमित होता है।
परीक्षण सीरम का एंटीबॉडी टिटर:
अच्छी तरह से पूर्ण (100 प्रतिशत) एग्लूटिनेशन परीक्षण सीरम के एंटीबॉडी टिटर के साथ तुलना में 50 प्रतिशत एग्लूटिनेशन देता है। हेपेटाइटिस बी वायरस, एचआईवी, थायरोग्लोबुलिन, आदि के खिलाफ एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए हेमगलगुटेशन किट उपलब्ध हैं।
जिलेटिन कण बढ़ाव:
जिलेटिन कण कण एग्लूटिनेशन परीक्षणों के लिए एरिथ्रोसाइट्स के विकल्प हैं। विशेष जिलेटिन कणों (लगभग 3 माइक्रोन व्यास) में एक अत्यधिक हाइड्रोफिलिक सतह होती है और इसलिए नमूना में मौजूद सामग्रियों का कोई गैर-बाध्यकारी बंधन नहीं होता है। जिलेटिन कण 40 डिग्री सेल्सियस पर चरण जुदाई और तीन आयामी क्रॉस-लिंकिंग द्वारा बनाए जाते हैं। परिणामी कण फॉर्मलाडिहाइड या ग्लूटेराल्डिहाइड के साथ तय किए जाते हैं।
जिलेटिन कणों में कोई प्रतिजैविकता नहीं होती है, और इसलिए वे हेमग्लूटीनेशन एसे (जैसे हेट्रोफाइल एंटीबॉडीज से जुड़ी समस्याओं से मुक्त होते हैं, जो विशेष रूप से आरबीसी के साथ गैर-प्रतिक्रिया कर सकते हैं और हेमग्लूटीनेशन एसे में झूठे-सकारात्मक एग्लूटीनेशन देते हैं)
लेटेक्स एग्लूटिनेशन टेस्ट:
एरिथ्रोसाइट्स और जिलेटिन के अलावा कुछ अन्य कणों का उपयोग उनकी सतह पर एंटीजन को ले जाने के लिए भी किया जा सकता है। विशिष्ट प्रतिपिंडों के साथ मिश्रित होने पर इस तरह के प्रतिजन लेपित कण बढ़ जाएंगे। प्रोटीन और पॉलीसैकराइड एंटीजन लेटेक्स कणों पर लेपित हो सकते हैं। ये एंटीजन कोटेड पार्टिकल्स एंटीबॉडीज की मौजूदगी को बढ़ाएंगे।
उलटा निष्क्रिय रक्तगुल्म परख:
रिवर्स पैसिव हेमग्लूटीनेशन में आरबीसी को ज्ञात एंटीबॉडी के साथ लेपित किया जाता है। इन किटों का उपयोग परीक्षण नमूनों में एंटीजन का पता लगाने के लिए किया जाता है, जैसे कि सीरम में HB s Ag।
रोज-वॉलर टेस्ट:
यह रुमेटी कारक का पता लगाने के लिए एक निष्क्रिय रक्तगुल्म परीक्षण है। मानव संधिशोथ कारक की एक विशेषता यह है कि यह मानव आईजीजी के साथ-साथ खरगोश आईजीजी के साथ बंध सकता है। भेड़ एरिथ्रोसाइट्स भेड़-बकरियों के आईजीजी एंटीबॉडी (खरगोश में उठाए गए) की सबग्लूटीटिंग मात्रा के साथ लेपित हैं। संधिशोथ कारक भेड़ एरिथ्रोसाइट्स को खरगोश विरोधी भेड़ आईजीजी के साथ लेपित करते हैं।
फ्लोकुलेशन टेस्ट:
फ्लोक्यूलेशन एक अन्य प्रकार का एंटीजन-एंटीबॉडी जटिल गठन परख है, जिसका उपयोग एंटीबॉडी का पता लगाने और उन्हें निर्धारित करने के लिए किया जाता है। एग्लूटीनेशन और वर्षा (जिसमें एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स ट्यूब के नीचे तक बस जाते हैं) के विपरीत, फ्लोक्यूलेशन टेस्ट में एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स को एकत्र करते हैं और फ्लोकोल के रूप में निलंबन में रहते हैं और परिणाम एक माइक्रोस्कोप के तहत पढ़े जाते हैं। इस तकनीक का उपयोग VDRL परीक्षण (वेनेरियल डिजीज रिसर्च लेबोरेटरी टेस्ट) में किया जाता है, जो ट्रेपोनिमा पैलिडम के खिलाफ एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए होता है, जो बैक्टीरिया उपदंश पैदा करता है।
वायरल रक्तगुल्म:
वायरल रक्तगुल्म एरिथ्रोसाइट एग्लूटिनेशन की एक विशेष श्रेणी है, जिसमें एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया शामिल नहीं है। कुछ वायरस आरबीसी के सतह प्रोटीन से बंधते हैं और इस बंधन से आरबीसी का सहज प्रसार होता है।
एक वायरस द्वारा आरबीसी के सहज एग्लूटीनेशन को विशिष्ट एंटी-वायरल एंटीबॉडी द्वारा रोका जा सकता है। वायरस के खिलाफ एंटीबॉडी वायरल सतह एंटीजन से जुड़ते हैं और वायरस और आरबीसी की बातचीत को रोकते हैं, और परिणामस्वरूप, आरबीसी उत्तेजित नहीं होते हैं। इसे वायरल हेमग्लूटीशन अवरोधक परख कहा जाता है और इसका उपयोग रोगियों के सीरम में वायरल एंटीबॉडीज को निर्धारित करने के लिए किया जाता है।
शीत-एग्लूटीनिन के लिए टेस्ट:
कुछ संक्रमणों (विशेष रूप से माइकोप्लाज्मा न्यूमोनिया) और ऑटोइम्यून रोगों के दौरान गठित एंटीबॉडी में 4 डिग्री सेल्सियस पर आरबीसी को एग्लूटीनेट करने की एक विशेष क्षमता है। इन एंटीबॉडी को ठंडा एग्लूटीनिन कहा जाता है।
रोगी के सीरम के सीरियल dilutions रात में 4 डिग्री सेल्सियस पर 1 प्रतिशत आरबीसी के साथ ऊष्मायन किया जाता है।
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नलिकाओं की जांच एग्लूटिनेशन की उपस्थिति के लिए की जाती है। यदि एग्लूटिनेशन मौजूद है, तो ट्यूब 37 डिग्री सेल्सियस पर फिर से जुड़ जाते हैं।
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37 डिग्री सेल्सियस पर आरबीसी का निष्क्रियकरण दर्शाता है कि सीरम में ठंडे एग्लूटीनिन होते हैं। शीत एग्लूटीनिन परख का उपयोग माइकोप्लाज्मा न्यूमोनिया संक्रमण के निदान के लिए किया जाता है। 50 से 80 प्रतिशत तीव्र माइकोप्लाज्मा न्यूमोनिया संक्रमित रोगियों में ठंडा एग्लूटीनिन होता है जो कि आईजीएम प्रकार का होता है।
