फ्लो साइटोमीटर के नैदानिक उपयोग
फ्लो साइटोमीटर के नैदानिक उपयोग!
1. विभिन्न कोशिकाओं (जैसे टी सेल और बी कोशिकाओं) की गणना।
2. बी सेल एंटीजन का पता लगाना और हेमटोपोइएटिक मैलिग्नेंसी (ल्यूकेमिया और लिम्फोमा) का वर्गीकरण।
3. माइलॉयड कोशिकाओं की सतह पर एंटीजन का पता लगाना, जो कि मायलोयड्सप्लास्टिक सिंड्रोम और माइलॉयड ल्यूकेमिया के निदान में उपयोगी है।
4. सीडी 34 अणुओं को हेमटोपोइएटिक स्टेम-प्रजनक कोशिकाओं की सतह पर व्यक्त किया जाता है। अस्थि मज्जा या परिधीय रक्त से पृथक स्टेम कोशिकाओं को CD34 में लेबल mAbs का उपयोग करके गणना की जाती है, ताकि स्टेम कोशिकाओं की सही संख्या की गणना की जा सके और एक मरीज को ट्रांसफ़्यूज़ किया जा सके। शेष स्टेम कोशिकाओं को तरल नाइट्रोजन में संग्रहित किया जाता है और जरूरत पड़ने पर उसी रोगी को बाद में ट्रांसफ़्यूज़ किया जा सकता है।
5. HLA फ़ेनोटाइपिंग फ़्लोर क्रोम प्रत्येक HLA एंटीजन के लिए लेबल किए गए mAbs का उपयोग MHC वर्ग I और वर्ग II प्रतिजनों को कोशिकाओं की सतह पर बांधने के लिए किया जाता है। रंग कोशिकाओं का बाद में विश्लेषण किया जाता है (जैसा कि कोशिकाएं एक एकल स्तंभ के रूप में गुजरती हैं) प्रवाह कोशिकामापी में।
6. इंट्रासेल्युलर एंटीजन का पता लगाना
कोशिकाओं को पहले एजेंटों के साथ व्यवहार किया जाता है जो सेल को पूरी तरह से तोड़ने के बिना सेल को पारगम्य बनाते हैं।
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बाद में, कोशिकाओं को जगह में साइटोप्लाज्मिक प्रोटीन को पार-लिंक करने के लिए हल्के परिरक्षकों के साथ इलाज किया जाता है और उन्हें सेल से बाहर लीक करने से रोकता है।
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तब कोशिकाओं को इंट्रासेल्युलर एंटीजन के खिलाफ निर्देशित लेबल mAbs के साथ इलाज किया जाता है। लेबल किए गए एमएबी कोशिकाओं में प्रवेश करते हैं और इंट्रासेल्युलर एंटीजन के साथ बांधते हैं।
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दाग कोशिकाओं का आकलन करने के लिए कोशिकाओं को प्रवाह कोशिकामापी के माध्यम से पारित किया जाता है।
मैं। इंट्रासेल्युलर टर्मिनल डीऑक्सीन्यूक्लियोटाइड ट्रांसफ़ेज़ (TdT) का पता लगाने से शुरुआती बी सेल दुर्दमताओं को परिभाषित करने में मदद मिलती है। TdT एक एंजाइम है जो इम्युनोग्लोबुलिन जीन पुनर्व्यवस्था के दौरान व्यक्त किया जाता है जो इम्युनोग्लोबुलिन खंडों के जंक्शनों पर यादृच्छिक न्यूक्लियोटाइड के अतिरिक्त के लिए जिम्मेदार है। इसलिए, एक घातक बी सेल आबादी में TdT की अभिव्यक्ति एक बहुत ही अपरिपक्व बी सेल फेनोटाइप इंगित करता है।
ii। इंट्रासेल्युलर मायेलोपरोक्सीडेज का पता लगाने से मायलोइड ल्यूकेमिया के विभिन्न उपप्रकारों के वर्गीकरण में मदद मिलती है।
7. कोशिकाओं की डीएनए सामग्री का विश्लेषण। फ्लो साइटोमीटर एक सेल में आनुवंशिक सामग्री की मात्रा का आकलन कर सकता है और कोशिकाओं की आबादी में एस-चरण अंश या aeuploidy की मात्रा निर्धारित कर सकता है, ए। डीएनए क्लोइड सामान्य कोशिकाएं जिनमें गुणसूत्र की दो प्रतियां होती हैं, उन्हें द्विगुणित कोशिका कहा जाता है।
सभी कोशिकाएं (डिंब और शुक्राणु को छोड़कर) जो द्विगुणित नहीं होती हैं, उन्हें अनूप्लिड माना जाता है और यह नियोप्लासिया के एक विश्वसनीय संकेतक के रूप में काम कर सकता है। एक ट्यूमर में बड़ी संख्या में कोशिकाओं में डीएनए की मात्रा कम होती है। फ्लो साइटोमेट्रिक डीएनए विश्लेषण फ्लोरोसेंट रंगों (जैसे प्रोपीडियम आयोडाइड) के साथ पारगम्य कोशिकाओं के ऊष्मायन द्वारा किया जाता है।
डाई डीएनए और फ़्लॉक्सीस में हस्तक्षेप करती है। प्रतिदीप्ति की मात्रा कोशिका की डीएनए सामग्री के सीधे आनुपातिक होती है। एक रोगी में दुर्दमता के लिए कीमोथेरेपी की प्रभावशीलता का आकलन प्लोइड विश्लेषण द्वारा किया जा सकता है। क्लोइड विश्लेषण व्यक्तिगत ट्यूमर कोशिकाओं में परमाणु डीएनए की कुल मात्रा निर्धारित करता है। डीएनए सूचकांक सामान्य कोशिका के डीएनए प्रतिदीप्ति के लिए ट्यूमर सेल के डीएनए प्रतिदीप्ति का अनुपात है। सामान्य द्विगुणित सेल का डीएनए सूचकांक 1. 1 से अधिक या उससे कम का डीएनए सूचकांक एक एनायूप्लोइड ट्यूमर को इंगित करता है।
ख। डीएनए सेल चक्र विश्लेषण:
प्रतिकृति के दौरान विभिन्न सेल चक्र चरणों में कोशिकाओं की डीएनए सामग्री (यानी, जीके / जीजे चरण-पूर्व डीएनए संश्लेषण चरण; एस चरण- डीएनए संश्लेषण; जी 2 / एम चरण- डीएनए संश्लेषण चरण) को वृद्धि के विकास का आकलन करने के लिए मापा जा सकता है। कैंसर की आक्रामकता। अधिक कैंसर आक्रामक कैंसर कोशिकाओं द्वारा संश्लेषित होता है। एस चरण से गुजरने वाली कोशिकाएं डीएनए संश्लेषण दिखाती हैं जो उनकी आक्रामकता के सीधे आनुपातिक हैं।
8. कई ल्यूकोसाइट कार्यात्मक assays प्रवाह cytometer के साथ किया जा सकता है।
मैं। O 2 का उत्पादन - (सुपरऑक्साइड) क्रोनिक ग्रैनुलोमैटस बीमारी के लिए एक परख के रूप में।
9. सेल व्यवहार्यता का पता लगाने:
डाई प्रोपिडियम आयोडाइड उन कोशिकाओं में प्रवेश करता है जिनमें टूटी हुई झिल्ली और एक बाधित परमाणु संरचना होती है। इसलिए, प्रोपीडियम आयोडाइड के साथ, मृत कोशिकाएं फ्लोरोसेंट हो जाएंगी, जबकि जीवित कोशिकाएं फ्लोरोसेंट नहीं होती हैं। इसके अलावा, प्रोपीडियम आयोडाइड का प्रतिदीप्ति स्पेक्ट्रम के सुदूर लाल हिस्से में है। इसलिए, इस विधि को नियमित एमएबी धुंधला के साथ जोड़ा जा सकता है, जिसमें मृत कोशिकाओं को लाल रंग से दाग दिया जाता है और इसलिए डेटा विश्लेषण से छोड़ा जा सकता है।
10. एपोप्टोसिस से गुजरने वाली कोशिकाओं का पता लगाने के लिए फ्लो साइटोमेट्रिक तरीके भी उपलब्ध हैं।
