एंटीजन और एंटीबॉडी के पूरक
एंटीजन और एंटीबॉडी के पूरक लागू करें!
सभी तीन पूरक सक्रियण मार्गों के पूरक घटकों में से प्रत्येक के सटीक निर्धारण के लिए तरीके और पूरक प्रणाली के कई एंजाइम और नियामक उपलब्ध हैं।
हालांकि, कई शोध केवल प्रयोगशालाओं में उपलब्ध हैं।
पूरक assays के दो प्रकार हैं:
1. ऐसे उपाय जो प्रोटीन को एंटीजन के रूप में पूरक करते हैं।
2. मानें कि पूरक की कार्यात्मक गतिविधि को मापते हैं।
एसेज़ जो प्रोटीन को पूरक करते हैं, क्योंकि एंटीजन आमतौर पर प्रदर्शन करने के लिए सरल, सस्ते, कम समय लेने वाले होते हैं, और कई प्रयोगशालाओं में किए जा सकते हैं। लेकिन ये प्रतिजन assays पूरक घटकों की कार्यात्मक क्षमताओं के बारे में जानकारी प्रदान नहीं करते हैं क्योंकि ये पूरक प्रतिजन assays कार्यात्मक रूप से सक्रिय पूरक घटकों और पूरक गिरावट उत्पादों दोनों का पता लगाते हैं।
मैं। आमतौर पर, एंटीजेनिक assays कार्यात्मक assays के रूप में संवेदनशील नहीं हैं।
ii। एंटीजेनिक assays शरीर के कुछ तरल पदार्थों में पूरक घटकों के निम्न स्तर का पता नहीं लगाते हैं।
iii। एलिसा assays पूरक सक्रियण के दौरान बनने वाले पूरक घटकों या परिसरों के विभाजन उत्पादों की माप के लिए उपलब्ध हैं।
iv। शास्त्रीय मार्ग के माध्यम से पूरक सक्रियण को सीरम में सी 4 डी और सी 4 के स्तरों का पालन करके मापा जा सकता है।
v। C1r-C1s-C1INH परिसरों का एलिसा माप शास्त्रीय मार्ग के माध्यम से पूरक सक्रियण का माप प्रदान करता है।
vi। वैकल्पिक मार्ग की सक्रियता को संचलन में Bb या C3bBbP परिसरों के स्तरों का आकलन करके एलिसा विधि द्वारा मापा जा सकता है।
vii। शास्त्रीय या वैकल्पिक मार्ग के सक्रियण को iC3b के स्तर या झिल्ली हमले के घुलनशील रूप sC5b6789 के स्तर को मापकर मॉनिटर किया जा सकता है।
viii। एलीफिलोटैक्सिन सी 3 ए और सी 5 ए को सीरम या प्लाज्मा में मापने के लिए एलिसा किट उपलब्ध हैं।
पूरक एसेस के लिए नमूना हैंडलिंग:
कार्यात्मक assays के पूरक के लिए नमूनों की उचित हैंडलिंग महत्वपूर्ण है। पूरक घटकों में से कुछ अत्यधिक प्रयोगशाला हैं।
मैं। अधिकांश कार्यात्मक assays के लिए, प्लाज्मा के बजाय सीरम को प्राथमिकता दी जाती है क्योंकि प्लाज्मा प्राप्त करने के लिए उपयोग किए जाने वाले कैल्शियम चेलेटर्स (जैसे EDTA, हेपरिन) पूरक के विरोधी हो सकते हैं।
ii। कार्यात्मक assays के लिए, रक्त को 30-60 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर और फिर कम से कम एक घंटे के लिए बर्फ पर रखना चाहिए।
iii। क्लैक बाध्यकारी assays के लिए, रक्त को कमरे के तापमान पर 2 घंटे के लिए थक्का देना चाहिए। थक्के को पांच मिनट के लिए 0 ° C से 4 ° C पर उखाड़ा और सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। यदि cryoprecipitating एंटीबॉडीज पर संदेह है, तो थक्का गठन और रक्त का सेंट्रीफ्यूजेशन 37 डिग्री सेल्सियस पर किया जाना चाहिए, क्योंकि नमूना ठंडा होने पर पूरक निर्धारण हो सकता है।
iv। सीरम या प्लाज्मा नमूनों को कई छोटे संस्करणों में बदल दिया जाना चाहिए और 40 से -80 डिग्री सेल्सियस पर तुरंत संग्रहीत किया जाना चाहिए।
v। जब सीरा को स्थानांतरित किया जाता है, तो उन्हें अच्छी तरह से सील किया जाना चाहिए और बड़ी मात्रा में सूखी बर्फ के साथ कंटेनरों में रखा जाना चाहिए।
पूरक कार्य:
कार्यात्मक assays के पूरक में प्रयुक्त बफ़र्स महत्वपूर्ण हैं क्योंकि दाढ़ और धातु आयन सांद्रता में परिवर्तन पूरक टिटर मूल्यों को प्रभावित कर सकता है। शास्त्रीय पूरक मार्ग के लिए CH 50 परख: शास्त्रीय मार्ग का सबसे सरल कार्यात्मक परख कुल हेमोलिटिक पूरक है।
पूरक घटकों में से किसी की अनुपस्थिति से कुल हेमोलिटिक पूरक टिटर (सीएच 50 ) शून्य हो जाता है। भेड़ एरिथ्रोसाइट्स आम तौर पर सीएच 50 या पृथक पूरक घटकों की कार्यात्मक गतिविधि को मापने के लिए लक्ष्य कोशिकाओं के रूप में उपयोग किया जाता है। भेड़ आरबीसी अन्य प्रजातियों के आरबीसी की तुलना में एंटीबॉडी और पूरक मध्यस्थता के प्रति अधिक संवेदनशील हैं।
वैकल्पिक पूरक मार्ग के लिए AH 50 परख:
खरगोश एरिथ्रोसाइट्स का उपयोग एएच 50 को मापने के लिए किया जाता है। रैबिट आरबीसी मानव सीरम द्वारा मध्यस्थता-रोधी स्वतंत्र लसीका के प्रति संवेदनशील होते हैं।
मैं। सीएच 50 और एएच 50 assays पूरक घटकों की आनुवंशिक कमी को बाहर करने के लिए उत्कृष्ट स्क्रीनिंग assays हैं।
ii। कम एएच 50 मूल्यों के साथ सामान्य सीएच 50 गतिविधि वैकल्पिक पूरक मार्ग में दोषों से उत्पन्न होती है।
iii। टर्मिनल पूरक घटकों में कमी से सीएच 50 और एएच 50 गतिविधियों का नुकसान होता है।
iv। एक पूरक घटक की होमोजीगस की कमी हेमोलिटिक परख को पूरी तरह से समाप्त कर देती है।
हेमोलिसिस की डिग्री कई कारकों से प्रभावित होती है, जैसे एरिथ्रोसाइट सांद्रता, एरिथ्रोसाइट्स की नाजुकता (उम्र), संवेदीकरण के लिए उपयोग किए जाने वाले एंटीबॉडी की मात्रा, एंटीबॉडी की प्रकृति (आईजीजी / आईजीएम), बफर सिस्टम की आयनिक ताकत, पी एच एच।, प्रतिक्रिया समय, तापमान, और कैल्शियम 2+ या मैग्नीशियम 2+ सांद्रता। मानव सीरम में CH50 इकाइयों के लिए मूल्य की गणना कई तरीकों से की जाती है, जैसे वॉन क्रॉच समीकरण।
व्यक्तिगत पूरक घटकों की कार्यात्मक कमी का मापन:
जब रोगी के इतिहास और लक्षण संभावित पूरक घटक की कमी का सुझाव देते हैं, तो व्यक्तिगत घटक के हेमोलिटिक अनुमापन की आवश्यकता हो सकती है। एरिथ्रोसाइट्स के लाइस का उत्पादन करने के लिए, पूरे पूरक घटकों (सी 1 - सी 9) की उपस्थिति और सक्रियण की आवश्यकता होती है। यदि कोई एक घटक अनुपस्थित है, तो हेमोलिसिस नहीं होता है। रोगी के सीरम या प्लाज्मा में किसी विशेष पूरक घटक की अनुपस्थिति का पता लगाने के लिए प्रत्येक व्यक्तिगत पूरक घटक की शुद्ध तैयारी की आवश्यकता होती है।
व्यक्तिगत पूरक घटकों को मापने के लिए आंशिक रूप से शुद्ध घटकों की आवश्यकता होती है। हालांकि, C4 की माप एक अपवाद है, क्योंकि C4- कमी (C4D) गिनी पिग सीरम की उपलब्धता के कारण। सी 2-कमी वाले मनुष्यों और गिनी सूअरों और सी 6-कमी वाले खरगोशों से सेरा कुछ प्रयोगशालाओं में उपलब्ध हैं।
व्यक्तिगत घटक के कार्यात्मक पूरक परख संवेदनशील होते हैं और पूरक घटक की गतिविधि के बारे में सटीक जानकारी प्रदान करते हैं। लेकिन इनमें से अधिकांश assays अनुसंधान प्रयोगशालाओं तक सीमित हैं।
एंटीजन विश्लेषण द्वारा व्यक्तिगत पूरक घटक का मापन:
एकल रेडियल प्रतिरक्षा-प्रसार, पूरक घटकों को निर्धारित करने की सबसे सामान्य विधि है, जैसे कि C3, C4 और कारक बी। यह याद रखना चाहिए कि सभी पूरक कार्यात्मक assays को सीरम की एंटी-पूरक कार्रवाई द्वारा बाधित किया जा सकता है (जिसके परिणामस्वरूप एंटीजन हो सकता है- एंटीबॉडी परिसरों, हेपरिन, chelating एजेंटों, और एकत्रित इम्युनोग्लोबुलिन की)।
पूरक निर्धारण परीक्षण:
जब एंटीजन-एंटीबॉडी इंटरैक्शन होता है, तो पूरक घटक सक्रिय होते हैं और खपत होते हैं। इसलिए पूरक के इन विट्रो परीक्षण खपत में एंटीजन-एंटीबॉडी बातचीत की उपस्थिति का संकेत मिलता है। इस सिद्धांत का उपयोग पूरक निर्धारण परीक्षण में प्रतिजन या एंटीबॉडी का पता लगाने और मापने के लिए किया जाता है।
परीक्षण दो चरणों में किया जाता है। पहले चरण में, एंटीजन-एंटीबॉडी इंटरैक्शन होता है और पूरक का सेवन किया जाता है। दूसरे चरण में, एक संकेतक प्रणाली का उपयोग यह पता लगाने के लिए किया जाता है कि पहले चरण की प्रतिक्रिया में पूरक का सेवन किया गया है या नहीं।
मैं। यदि पहले चरण में पूरक का सेवन किया जाता है, तो इसका मतलब है कि पहले चरण में एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया हुई है।
ii। यदि पूरक का सेवन नहीं किया जाता है, तो इसका मतलब है कि पहले चरण में एंटीजन-एंटीबॉडी बातचीत नहीं थी।
पूरक निर्धारण परीक्षण द्वारा एंटीबॉडी का पता लगाना:
पहला चरण:
ज्ञात एंटीजन और पूरक के सामान्य सांद्रता (आमतौर पर ताजा गिनी पिग सीरम को पूरक के स्रोत के रूप में उपयोग किया जाता है) लिया जाता है। सीरम युक्त (अज्ञात एंटीबॉडी) जोड़ा जाता है और ऊष्मायन किया जाता है।
A. ज्ञात एंटीजन + पूरक + सीरम (वर्तमान में मौजूद एंटीबॉडी)। ऊष्मायन के दौरान पूरक का सेवन किया जाता है।
बी ज्ञात एंटीजन + पूरक -1- सीरम (इसी एंटीबॉडी अनुपस्थित)। पूरक का सेवन नहीं किया जाता है क्योंकि सीरम में एंटीबॉडी नहीं होते हैं जो ज्ञात एंटीजन के लिए विशिष्ट होते हैं।
दूसरे चरण:
भेड़ विरोधी एरिथ्रोसाइट खरगोश के साथ लेपित भेड़ एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी को ट्यूबों में जोड़ा जाता है। पूरक की उपस्थिति में, भेड़ एरिथ्रोसाइट्स लाइसेड (हेमोलिसिस) द्वारा होगा। पूरक के अभाव में एरिथ्रोसाइट्स (कोई हेमोलिसिस) नहीं छोड़ेगा।
A. चूंकि पहले चरण की प्रतिक्रिया के दौरान पूरक का उपयोग किया जाता है, एंटीबॉडी-लेपित भेड़ एरिथ्रोसाइट्स लाइस नहीं होते हैं। इसलिए हेमोलिसिस की अनुपस्थिति बताती है कि सीरम में परीक्षण में प्रयुक्त एंटीजन के खिलाफ विशिष्ट एंटीबॉडी होते हैं।
ख। चूंकि पहले चरण में पूरक का उपयोग नहीं किया जाता है, दूसरे चरण में पूरक द्वारा एंटीबॉडी-लेपित भेड़ एरिथ्रोसाइट्स को हेमोलिसिस किया जाता है। इसलिए, हेमोलिसिस की उपस्थिति से पता चलता है कि सीरम में एंटीजन के खिलाफ विशिष्ट एंटीबॉडी का उपयोग नहीं किया गया है।
पूरक निर्धारण परीक्षण व्यापक रूप से नैदानिक प्रयोगशालाओं और अनुसंधान में उपयोग किया जाता है। विषाणु, वायरल संक्रमण के खिलाफ सीरम एंटीबॉडी, ट्रेपोनिमा पैलिडम के खिलाफ एंटीबॉडी जो सिफलिस का कारण बनता है, एंटी-फंगल एंटीबॉडीज (Coccidioidomycosis immitis, Histoplasma capsulatum), एंटी-मायकोप्लाज़्मा न्यूमोनिया एंटीबॉडी और एंटी-रेसिसियल एंटीबॉडी को फिक्सेशन टेस्ट के लिए पहचाना जाता है।
