एंटीजन या एंटीबॉडी का प्रतिरक्षण

एंटीजन या एंटीबॉडी का इम्यूनोडिफ़्यूज़न!

प्रतिरक्षण द्वारा इम्यूनोडिफ़्यूज़न एक समर्थन माध्यम में एंटीजन या एंटीबॉडी या एंटीजन और एंटीबॉडी दोनों अणुओं के आंदोलन को संदर्भित करता है।

एंटीजन और एंटीबॉडी एक-दूसरे के साथ बंधते हैं और अघुलनशील इम्यूनो- प्रीसिपिट्री बनाते हैं, जो कि नंगी आंखों को प्रिपिसिटिन बैंड या लाइन के रूप में दिखाई देता है। जे। ओडिन ने कृषि-भरे ट्यूबों में एंटीजन और एंटीबॉडी के एकल प्रसार की एक प्रणाली का वर्णन किया।

जल्द ही आउटरलीनी ने अगार में दोहरा प्रसार बताया, स्लाइड्स पर स्तरित। आंदोलन को रैखिक या रेडियल के रूप में भी वर्णित किया गया है। इम्यूनोडिफ़्यूज़न विधियों का उपयोग सीरम प्रोटीन के गुणात्मक और मात्रात्मक विश्लेषण के लिए किया जाता है। हालांकि अधिक संवेदनशील और विशिष्ट तरीके जैसे एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोबेसॉर्बेंट एले (एलिसा) और रेडियो इम्युनोसाय (आरआईए) ने इम्युनोडिफ़्यूजन विधियों को लगभग बदल दिया है।

एकल प्रतिरक्षण:

या तो एंटीजन या एंटीबॉडी निश्चित रहता है और अन्य प्रतिक्रियाशील चाल (यूडिन की डिफ्यूजन तकनीक)।

डबल इम्यूनोडिफ़्यूज़न:

एंटीजन और एंटीबॉडी दोनों एक दूसरे की ओर बढ़ने के लिए स्वतंत्र हैं। (Ouchterlony तकनीक)।

पिघला हुआ अगर ग्लास स्लाइड या पेट्रीडिश पर डाला जाता है और जमने दिया जाता है। कुछ मिलीमीटर की दूरी पर दो छोटे कुएं अलग-अलग हैं। एंटीजन और संबंधित एंटीबॉडी समाधान विपरीत कुओं में गिराए जाते हैं। फिर स्लाइड / पेट्रीडिश को 18-24 घंटों के लिए नम कक्ष में रखा जाता है। एंटीजन और एंटीबॉडी अग्र के माध्यम से चलते हैं और एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स बनाने के लिए गठबंधन करते हैं। प्रतिजन-एंटीबॉडी परिसर एक वर्षा रेखा के रूप में दिखाई देता है।

तुलनात्मक उद्देश्यों के लिए विभिन्न कोणों पर एंटीजन और एंटीबॉडी कुओं को रखकर डबल प्रसार भी किया जाता है। इन प्रतिक्रियाओं के तीन पैटर्न चित्र 27.2 में दिखाए गए हैं।

मैं। पहचान की प्रतिक्रिया:

दो कुओं में एंटीजन समान हैं (Agl और Ag2)। तो एंटीबॉडी के साथ प्रतिक्रिया ठीक एक समान प्रीसिपिटिन लाइनों में परिणाम करती है। प्रीसिपिटिन रेखाएं पार नहीं करती हैं, लेकिन एक सतत रेखा बनाती हैं। दो प्रीपीसिटिन लाइनों का संलयन इंगित करता है कि एंटीबॉडी दो एंटीजन पर आमतौर पर मौजूद एपिटोप के साथ प्रतिक्रिया कर रही है।

ii। गैर-पहचान की प्रतिक्रिया:

दो गैर-समान एंटीजन (Agl और Ag3) एंटीजन कुओं में होते हैं जबकि एंटीबॉडी कुएं में दोनों एंटीजन के एंटीबॉडी होते हैं। गठित दो एंटीजन-एंटीबॉडी प्रीपिलेटिन लाइनें एक-दूसरे से भिन्न होती हैं। अत: दो प्रीसिपिटिन लाइनें एक-दूसरे को पूरी तरह से पार करती हैं।

iii। आंशिक पहचान की प्रतिक्रिया:

दो कुओं के एंटीजन में एंटीजेनिक निर्धारक आंशिक रूप से (एग्ल और अगला) साझा किए जाते हैं। इसलिए प्रतिजन दोनों प्रतिजनों के साथ प्रतिक्रिया करता है और रेखाएं बनाता है जो एक पूर्ण क्रॉस नहीं बनाते हैं। प्रीसिपिटिन लाइन केवल एक दिशा में पार करती है। विस्तारित प्रिपिसिटिन लाइन को स्पर कहा जाता है। स्पर संकेत देता है कि एंटीबॉडी अतिरिक्त एपिटोप का भी शिकार कर रही है जो एंटीजन में से एक में मौजूद नहीं है।

एंटीजन या एंटीबॉडी के अर्ध मात्रात्मक विश्लेषण (छवि। 27.3) के लिए डबल इम्युनोडिफ्यूजन का भी उपयोग किया जा सकता है।

चित्र 27.3:

एंटीजन के अर्ध-मात्रात्मक विश्लेषण के लिए डबल इम्युनोडिफ्यूजन। एंटीबॉडी को केंद्रीय कुएं में रखा जाता है और प्रतिजन कुओं में एंटीजन को अलग-अलग सांद्रता में रखा जाता है

मैं। प्रतिजन की मात्रा:

एंटीजन एक्स को क्रमिक रूप से पतला किया जाता है और एक केंद्रीय कुएं के आसपास के कुओं में रखा जाता है जिसमें एंटी-एक्स एंटीबॉडी को रखा जाता है। प्रतिजन और एंटीबॉडी कुओं से बाहर फैलते हैं और एक दूसरे के साथ प्रतिक्रिया करते हैं, जिसके परिणामस्वरूप एंटीजन और एंटीबॉडी कुओं के बीच प्रीपिस्पिटिन लाइनें बनती हैं। विभिन्न कुओं में प्रतिजनों की घटती मात्रा के साथ प्रतिजन-प्रतिरक्षी अवक्षेप की मात्रा घट जाती है। इसलिए, एंटीजन सांद्रता कम होने के साथ ही प्रीसिपिटिन लाइनों की मोटाई कम हो जाती है।

ii। एंटीबॉडी की मात्रा:

एंटीजन की मात्रा के समान एक प्रक्रिया का उपयोग किया जाता है, सिवाय इसके कि एंटीजन और एंटीबॉडी की स्थिति बदल जाती है। प्रतिजन को केंद्रीय कुएं में रखा जाता है और विभिन्न तंतुओं में एंटीबॉडी को बाहर के कुओं में रखा जाता है।

एकल रेडियल प्रतिरक्षण:

Mancini ने एंटीजन के सटीक परिमाण के लिए इस उपन्यास तकनीक की शुरुआत की। एंटीबॉडी को पिघला हुआ अगर के साथ मिलाया जाता है और पेट्री डिश में डाला जाता है। अगर के ठोसकरण के बाद, कुओं को काट दिया जाता है, और एंटीजन के विभिन्न सांद्रता से भरा होता है (चित्र 27.4)।

प्रतिजन कुएं से बाहर फैलता है और 48-72 घंटों में प्रतिजन-प्रतिरक्षी जटिल अवक्षेप बनाता है। अवक्षेप को प्रत्येक कुएं के चारों ओर एक सफेद गोलाकार रेखा के रूप में देखा जाता है। वृत्ताकार वलय का व्यास सीधे प्रतिजन सांद्रता के लिए आनुपातिक होता है (यानी, प्रतिजन एकाग्रता अधिक, अवक्षेप का व्यास अधिक होता है)।

एक्स अक्ष और वाई अक्ष में व्यास को ज्ञात एंटीजन सांद्रता की साजिश रचकर एक मानक वक्र को ग्राफ शीट में प्लॉट किया जा सकता है। परीक्षण प्रतिजन, जिसकी एकाग्रता अज्ञात है, परीक्षण प्रतिजन द्वारा गठित वेग के व्यास के साथ मानक वक्र को प्रक्षेपित करके निर्धारित किया जा सकता है।

इस विधि की संवेदनशीलता प्रतिजन के 1-3 माइक्रोग्राम / एमएल है। इस विधि का उपयोग IgG, IgM, या IgA (क्रमशः एंटी-IgG, एंटी- IgM, या एंटी-IgA एंटीसेरा में शामिल करके) की सांद्रता को निर्धारित करने के लिए किया जाता है।