Immunofluorescence कोशिकाओं में एंटीजन की जांच के लिए इस्तेमाल किया
कोशिकाओं में एंटीजन का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जाने वाला इम्यूनोफ्लोरेसेंस!
ऊतकों में एंटीजन का पता लगाने के लिए इम्यूनोकेमिकल के रूप में फ्लोरोसेंट यौगिकों को कॉन्स (1941) द्वारा पेश किया गया था।
इम्यूनोफ्लोरेसेंस का उपयोग कोशिकाओं या ऊतकों में एंटीजन (ज्ञात एंटीबॉडी का उपयोग करके) के साथ-साथ सीरम में एंटीबॉडी का पता लगाने (ज्ञात एंटीजन का उपयोग करके) के लिए किया जाता है। प्रतिदीप्ति एक रंग के प्रकाश का उत्सर्जन है जब पदार्थ दूसरे रंग के प्रकाश के संपर्क में होता है। जब एक फ्लोरोसेंट पदार्थ विशेष तरंग लंबाई के प्रकाश से उत्साहित होता है तो यह प्रकाश को अवशोषित करता है और एक अन्य तरंग लंबाई का प्रकाश उत्सर्जित करता है।
मैं। फ्लूरोरेसेन आइसोथियोसाइनेट (FITC) में 490-495 एनएम पर अधिकतम प्रकाश का अवशोषण होता है, और यह 530 एनएम (हरा रंग) पर प्रकाश का उत्सर्जन करता है।
ii। टेट्रामेथिल रोडामाइन आइसोथियोसाइनेट में 550 एनएम पर अधिकतम प्रकाश का अवशोषण होता है और लाल रंग का प्रकाश (580 एनएम) निकलता है।
ए। प्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस:
इस तकनीक का उपयोग कोशिकाओं या ऊतकों में एंटीजन का पता लगाने के लिए किया जाता है।
ऊतक, जिसमें अज्ञात एंटीजन है, एक ग्लास स्लाइड के लिए तय किया गया है।
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FIT (संयुग्म के रूप में जाना जाता है) से संयुग्मित (ब्याज के प्रतिजन के लिए विशिष्ट) ज्ञात ऊतक पर स्तरित और ऊष्मायन है।
मैं। यदि ब्याज की प्रतिजन ऊतकों में है, तो संयुग्म प्रतिजन को बांधता है।
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फिर अनबाउंड संयुग्म को हटाने के लिए स्लाइड को धोया जाता है।
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फिर स्लाइड को फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के तहत देखा जाता है।
मैं। यदि ऊतक में एंटीजन है तो चमकीले हरे रंग को देखा जाएगा।
ii। यदि ऊतक में कोई एंटीजन नहीं है, तो धोने के चरण के दौरान सभी संयुग्म धोया गया होगा और परिणामस्वरूप, कोई हरा रंग नहीं है।
इस तकनीक का उपयोग संक्रमित ऊतकों में बैक्टीरिया या वायरल एंटीजन की उपस्थिति का पता लगाने के लिए भी किया जाता है।
ख। अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस:
इस तकनीक का उपयोग सीरम में एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए किया जाता है।
ज्ञात एंटीजन वाले सेल ग्लास स्लाइड के लिए तय किए गए हैं।
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परीक्षण सीरम को स्लाइड पर जोड़ा जाता है और ऊष्मायन किया जाता है।
मैं। यदि सीरम में एंटीबॉडी (कोशिकाओं में एंटीजन के खिलाफ) हैं, तो एंटीबॉडी कोशिकाओं में एंटीजन से बंध जाएंगे।
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फिर अनबाउंड सीरम घटकों को हटाने के लिए स्लाइड को धोया जाता है।
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एंटी-ह्यूमन इम्युनोग्लोबुलिन FITC से संयुग्मित होता है और जोड़ा जाता है।
मैं। एफआईटीसी संयुग्मित मानव-विरोधी इम्युनोग्लोबुलिन सेल एंटीजन से बंधे हुए सीरम एंटीबॉडी से बंधेगा।
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धोने के बाद, स्लाइड फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के तहत देखी जाती है।
मैं। चमकीले हरे रंग की उपस्थिति इंगित करती है कि सीरम में कोशिकाओं में एंटीजन के खिलाफ एंटीबॉडी हैं।
ii। हरे रंग की अनुपस्थिति उपयोग की गई कोशिकाओं में एंटीजन के खिलाफ सीरम एंटीबॉडी की अनुपस्थिति को इंगित करती है।
