प्रोटीन का पश्चिमी सोख्ता

प्रोटीन का पश्चिमी सोख्ता!

100 डिग्री सेल्सियस पर एक आयनिक डिटर्जेंट (एसडीएस: सोडियम डोडेसिल सल्फेट) के साथ ऊष्मायन द्वारा प्रोटीन का क्षय किया जाता है।

एसडीएस सभी प्रोटीनों को समान रूप से कोट करता है और प्रोटीन के सतह आवेश को ऋणात्मक बनाता है।

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तब विकृत प्रोटीन पाली-एक्रिलामाइड जेल में इलेक्ट्रोफोरेस होता है। प्रोटीन अपने आणविक भार के आधार पर अलग-अलग बैंड के रूप में अलग हो जाते हैं।

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पृथक प्रोटीन एक फिल्टर पेपर (नायलॉन या नाइट्रोसेल्युलोज) में स्थानांतरित होने वाले इलेक्ट्रोफोरेटिक सहयोगी हैं।

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फिर फिल्टर पेपर को प्रोटीन के खिलाफ एंटीसेरा से उकेरा जाता है। एंटीबॉडी फिल्टर पेपर पर अपने संबंधित प्रोटीन एंटीजन से बांधते हैं और एंटीजन-एंटीबॉडी परिसरों का निर्माण करते हैं।

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अनबाउंड सीरम घटकों को हटाने के लिए फिल्टर पेपर धोया जाता है।

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एंटी-इम्युनोग्लोबुलिन (संयुग्म के रूप में जाना जाता है) नामक एंजाइम को फिल्टर पेपर में जोड़ा जाता है और ऊष्मायन किया जाता है।

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संयुग्मन फिल्टर पेपर में एंटीजन-एंटीबॉडी परिसर में एंटीबॉडी से बांधता है।

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अनबाउंड संयुग्म को हटाने के लिए फिल्टर पेपर धोया जाता है और सब्सट्रेट को जोड़ा जाता है और ऊष्मायन किया जाता है।

मैं। रंगीन बैंड उन स्थानों पर विकसित होते हैं जहां एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स होते हैं।

iii। बैंड के गैर विकास से पता चलता है कि एंटीजन के खिलाफ संबंधित एंटीबॉडी परीक्षण सीरम में अनुपस्थित है।

एंटीजन के साथ लगाए गए फिल्टर पेपर को लंबे समय तक संग्रहीत किया जा सकता है।

पश्चिमी धब्बा परख का व्यापक रूप से हेपेटाइटिस सी वायरस एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए और मानव इम्यूनोडिफीसिअन्सी वायरस (एचआईवी) के खिलाफ एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए एक पुष्टिकरण परीक्षण के रूप में किया जाता है।

वाणिज्यिक कंपनियां पृथक एचआईवी एंटीजन के साथ फिल्टर पेपर को लगाती हैं और प्रयोगशालाओं को आपूर्ति करती हैं। प्रयोगशाला में, रोगी के सीरम को फिल्टर पेपर में जोड़ा जाता है और सीरम में एचआईवी विशिष्ट एंटीबॉडी की उपस्थिति का पता लगाने के लिए संसाधित किया जाता है।

radioimmunoassay:

Radioimmunoassay (RIA) को पहली बार Rosalin Yalow और Berson (1959) द्वारा विकसित किया गया था। विधि में कई बदलाव पेश किए गए हैं। दो मुख्य आरआईए तकनीक, प्रतिस्पर्धी आरआईए और गैर-प्रतिस्पर्धी आरआईए हैं।

विभिन्न रेडियोसोटोप को लेबल (तालिका 27.4) के रूप में उपयोग किया जाता है और रेडियोधर्मी उत्सर्जन को प्रति मिनट गणना (सीपीएम) के संदर्भ में मापा जाता है। सबसे लोकप्रिय लेबल, ¹²⁵ मुझे सिग्नल की गिनती के लिए कम समय की आवश्यकता होती है, लेकिन इसकी अल्पावधि जीवन के कारण इसका सीमित शेल्फ जीवन है। ट्रिटियम ( ³ एच) रेडियोआइसोटोप को गिनती के लिए अधिक समय की आवश्यकता होती है और इसलिए कुल परख समय में वृद्धि होती है।

आरआईए के फायदे हैं:

मैं। सटीक और उच्च गुणवत्ता

ii। आइसोटोप संयुग्मन आसान है

iii। अनुकूलन के बिना सिग्नल का पता लगाना

तालिका 27.4: रेडियोइम्यूनोसाय में प्रयुक्त रेडियोसोटोप के गुण:

हालांकि, आरआईए के निम्नलिखित नुकसान हैं

मैं। अभिकर्मकों का छोटा आधा जीवन

ii। रेडियोधर्मिता के खतरे।