लिम्फोसाइट सक्रियण एसेस पर उपयोगी नोट्स
एंटीजन या मिटोगेंस के जवाब में लिम्फोसाइटों की कार्यात्मक क्षमताएं लिम्फोसाइट सक्रियण assays द्वारा निर्धारित की जाती हैं।
इसलिए, लिम्फोसाइटों की एक सरल गणना की तुलना में लिम्फोसाइट सक्रियण assays व्यक्ति के इम्युनोकोम्पेटेंस का आकलन करने के लिए अधिक उपयुक्त हैं।
लिम्फोसाइट सक्रियण assays के दो प्रकार हैं:
मैं। लिम्फोसाइट सतह पर 'सक्रियण मार्कर' का पता लगाना।
ii। टी सेल उत्तेजना के बाद लिम्फोसाइटों के प्रसार की क्षमता का आकलन।
टी लिम्फोसाइट प्रसार का आकलन करने के लिए सबसे अधिक इस्तेमाल किया जाने वाला टी सेल उत्तेजना हैं:
मैं। लेक्टिंस [जैसे कि फाइटोएम्ग्लगुटिनिन (PHA), और कंकनवेलिन ए (ConA)
ii। जीवाणु विषाक्त पदार्थ जो सुपर एंटीजन के रूप में कार्य करते हैं
iii। रासायनिक यौगिक [जैसे कि फोर्बल मिरिस्टेट एसीटेट (पीएमए), कैल्शियम आयनोफोर्स
iv। साइटोकिन्स
v। mAbs को सतह रिसेप्टर्स (विशेष रूप से T कोशिकाओं पर CD3 अणु)
बी सेल सक्रियण से प्रेरित है:
मैं। पोकेवीड मिटोजन (पीडब्लूएम)। PWM टी कोशिकाओं को भी सक्रिय करता है
ii। सुपर एंटीजन
iii। Lipopolysaccharides
iv। mAbs कि क्रॉस-लिंक बी सेल सतह पर स्लैग करता है।
ए। शुद्ध लिम्फोसाइटों को 96 अच्छी तरह से माइक्रो टिटर कुओं में सुसंस्कृत किया जाता है और एंटीजन या माइटोजेन (आमतौर पर 48 घंटे) के साथ उत्तेजित किया जाता है।
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Tritiated thymidine ( 3 H-Tdr) कुओं में जोड़ा जाता है और ऊष्मायन किया जाता है
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कुओं की सामग्री को फिल्टर के माध्यम से और फ़िल्टर किया जाता है और फ़िल्टर पेपर में 3 एच टीडीआर की मात्रा को मापा जाता है। क्रोमोसोमल डीएनए में 3 H-Tdr का समावेश कोशिका प्रसार को दर्शाता है।
ख। कोशिकाओं के प्रसार को निर्धारित करने के लिए गैर-अभिवाही assays हैं। ये assays फ्लोरोसेंट रंगों का उपयोग करते हैं जो डीएनए या रंगों में शामिल होते हैं जो एमटीटी जैसे ऑक्सीडेटिव श्वसन को मापते हैं।
सी। ब्रोमोडॉक्सीयूरिडीन (BrdU) को अत्यधिक प्रतिकृति कोशिकाओं के डीएनए में शामिल किया गया है और इसलिए इसका उपयोग कोशिका प्रसार का आकलन करने के लिए किया जा सकता है। कोशिकाओं में शामिल BrdU का उपयोग BrdU और प्रवाह साइटोमेट्री (प्रवाह cytometry द्वारा इंट्रासेल्युलर एंटीजन का पता लगाने) के खिलाफ mAbs का उपयोग करके किया जाता है।
BrdU को विवो में कैंसर रोगियों के लिए भी प्रशासित किया जा सकता है और बाद में ट्यूमर को बचाया जा सकता है और BrdU के निगमन के लिए ट्यूमर कोशिकाओं का आकलन किया जा सकता है। यह परख एक मरीज में ट्यूमर कोशिकाओं के प्रसार अंश के बारे में एक विचार प्रदान करता है।
घ। Cytotoxic T सेल सक्रियण 51 क्रोमियम रिलीज परख द्वारा assayed है:
लक्ष्य कोशिकाओं को रेडियोधर्मी क्रोमियम ( 51 Cr) के साथ लेबल किया जाता है, जो लक्ष्य कोशिकाओं के इंट्रासेल्युलर प्रोटीन को बांधता है।
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लेबल किए गए लक्ष्य कोशिकाओं को साइटोटोक्सिक टी कोशिकाओं के साथ जोड़ा जाता है।
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साइटोलिटिक टी कोशिकाओं द्वारा लक्ष्य सेल lysis 51 Cr की रिहाई में परिणाम।
कोशिकाओं को अपकेंद्रित्र किया जाता है और सतह पर तैरनेवाला में 51 सीआर को मापा जाता है। जारी 51 Cr की मात्रा कोशिकाओं के lysis के लिए आनुपातिक है।
