हाइड्रोलाइज यूरिया (चित्रा के साथ) की क्षमता का पता लगाने के लिए बैक्टीरिया पर यूरिया टेस्ट

हाइड्रोलाइज यूरिया (चित्रा के साथ) में उनकी क्षमता का पता लगाने के लिए बैक्टीरिया पर यूरिस टेस्ट!

सिद्धांत:

कुछ बैक्टीरिया एनएच ₃ और सीओ ₂ को यूरिया (पानी की उपस्थिति में टूटने) यूरिया को जलाने की क्षमता रखते हैं, क्योंकि वे एंजाइम 'यूरेस' का उत्पादन कर सकते हैं।

एनएच ₃ क्षारीय (मूल) है, जिसके कारण, यह पीएच को लाल से गुलाबी रंग में बदलकर पीएच को बढ़ाता है।

यूरिया परीक्षण में, यूरिया और फिनोल लाल युक्त अगर स्लाटरों पर टेस्ट बैक्टीरिया उगाए जाते हैं। यदि बैक्टीरिया यूरिया को हाइड्रोलाइज करने की क्षमता रखते हैं, तो माध्यम का रंग पीले से गुलाबी हो जाता है। कुछ बैक्टीरिया मध्यम में पेप्टोन को तोड़कर एनएच _{3 का} उत्पादन कर सकते हैं। ऐसे मामलों में गलत सकारात्मक परिणाम प्राप्त होता है।

सामग्री की आवश्यकता:

टेस्ट ट्यूब, शंक्वाकार फ्लास्क, कपास प्लग, इनोक्युलेटिंग सुई, आटोक्लेव, बन्सन बर्नर, लैमिनर फ्लो चैंबर, डिस्पोजल जार, इनक्यूबेटर, झिल्ली निस्पंदन उपकरण, यूरिया अगर, पृथक कालोनियों या बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों।

प्रक्रिया:

1. पांच टेस्ट ट्यूब कॉटन-प्लग किए गए हैं, शिल्प पेपर के साथ कवर किए गए हैं और धागे या रबर बैंड (चित्रा 7.15) के साथ बंधे हैं।

2. यूरिया अगर माध्यम की सामग्री (मुख्य घटक के रूप में यूरिया युक्त) या इसके तैयार पाउडर (यूरिया को छोड़कर) माध्यम के 100 मिलीलीटर के लिए आवश्यक होता है और 250 मिलीलीटर शंक्वाकार फ्लास्क में आसुत जल के 90 मिलीलीटर में तौला और भंग किया जाता है। झटकों और घूमता है।

3. इसका पीएच एक पीएच पेपर या पीएच मीटर का उपयोग करके निर्धारित किया जाता है और अगर यह कम है तो 0.1N एचसीआई का उपयोग करके या 0.1N HCOH का उपयोग करके 6.9 पर समायोजित किया जाता है।

4. पूरी तरह से मध्यम में अगर को भंग करने के लिए फ्लास्क को गरम किया जाता है।

5. फ्लास्क कपास-प्लग है, शिल्प कागज के साथ कवर किया गया है और धागे या रबर बैंड के साथ बांधा गया है।

6. पांच टेस्ट ट्यूब और यूरिया अगर (यूरिया को छोड़कर) युक्त शंक्वाकार फ्लास्क एक आटोक्लेव में 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस (15 साई दबाव) पर निष्फल होते हैं।

7. नसबंदी के बाद, उन्हें आटोक्लेव से हटा दिया जाता है और माध्यम को जमने की अनुमति दिए बिना कुछ समय के लिए ठंडा करने की अनुमति दी जाती है। माध्यम को ठंडा करने से कंडेन्स पर पानी की बूंदों के संघनन और संचय को रोकता है। यदि माध्यम पहले से ही तैयार किया गया है और भंडारण के दौरान जम गया है, तो इसे पूरी तरह से पिघलने तक सावधानी से गर्म करके तरलीकृत करना होगा।

8. 20% यूरिया का घोल, आसुत जल के 100 मिलीलीटर में 20 ग्राम यूरिया को घोलकर तैयार किया जाता है और झिल्ली निस्पंदन तंत्र द्वारा निष्फल किया जाता है, क्योंकि यूरिया को गर्मी द्वारा निष्फल नहीं किया जा सकता है, क्योंकि यह गर्म होने पर विघटित हो जाता है।

9. निष्फल यूरिया घोल के 10 मिलीलीटर को 90 मिलीलीटर निष्फल ठंडा द्रवीकृत माध्यम (गर्म करके द्रवीभूत) के साथ अच्छी तरह मिलाया जाता है।

10. इससे पहले कि यह जम जाता है, मध्यम, गर्म पिघला हुआ स्थिति में, असमान रूप से 5 कपास-प्लग निष्फल परीक्षण ट्यूबों (लगभग 20 मिलीलीटर प्रत्येक) में वितरित किया जाता है।

11. परीक्षण ट्यूबों को मध्यम और ठंडा करने के लिए तिरछी स्थिति में रखा जाता है, ताकि यूरिया अगर तिरछा हो सके।

12. परीक्षण बैक्टीरिया को असमान रूप से, अधिमानतः एक लामिना का प्रवाह कक्ष में, बट में मारकर और एक लौ- निष्फल सुई की मदद से तिरछी सतह पर टकराकर तिरछे रूप में निष्क्रिय कर दिया जाता है। प्रत्येक टीका के बाद सुई को निष्फल कर दिया जाता है।

13. एक इनक्यूबेटर में 24 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनोकेटेड तिरछे ऊष्मायन होते हैं।