इम्यूनोहिस्टोकेमिकल परख तकनीकें ट्यूमर एंटीजन का पता लगाने के लिए

Immunohistochemical assays व्यापक रूप से ट्यूमर एंटीजन का पता लगाने और शल्य चिकित्सा पथ वर्गों में लिम्फोसाइट सेल प्रकार को वर्गीकृत करने के लिए उपयोग किया जाता है।

ऊतक नमूना एक ग्लास स्लाइड पर तय किया गया है।

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एंजाइम लेबल mAb (संयुग्म) नमूना और ऊष्मायन पर स्तरित है।

मैं। यदि नमूना में mAb के खिलाफ विशिष्ट प्रतिजन है, तो संयुग्मन प्रतिजन पर प्रतिजन को बांधता है।

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धोने के बाद, सब्सट्रेट को जोड़ा जाता है और ऊष्मायन किया जाता है।

मैं। रंग का विकास यह दर्शाता है कि, एमएबी के खिलाफ विशिष्ट एंटीजन ऊतक अनुभाग में मौजूद है।

ii। विशिष्ट प्रतिजन की अनुपस्थिति में, कोई रंग विकास नहीं है।

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स्लाइड को धोया जाता है और ऊतक की धारा को रंग की उपस्थिति के लिए माइक्रोस्कोप के नीचे देखा जाता है।

हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज (एचआरपी) आमतौर पर इम्यूनोहिस्टोकेमिकल तकनीक में इस्तेमाल किया जाने वाला एंजाइम है। एचआरपी के लिए सब्सट्रेट हाइड्रोजन पेरोक्साइड और डायनामीनो-बेंजिडाइन है। Diaminobenzidine के साथ HRP की प्रतिक्रिया एक काले रंग का उत्पादन करती है।

पेरोक्सीडेस- एंटीपाइरोक्सीडेज (पीएपी) एक अन्य तरीका है जिसका उपयोग सर्जिकल पैथोलॉजी में एंजाइम और ट्यूमर से संबंधित कैंसर के लिए किया जाता है।

यह एक तीन चरण विधि है:

चरण 1:

एक विशेष एंटीजन होने का संदेह ऊतक एक ग्लास स्लाइड के लिए तय किया गया है।

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प्रश्न में एंटीजन के लिए ज्ञात खरगोश एंटीबॉडी एक गिलास स्लाइड के लिए तय ऊतक (प्रतिजन के लिए संदिग्ध) पर गिरा दिया जाता है।

मैं। यदि संबंधित प्रतिजन ऊतक में होता है, तो एंटीबॉडी इसे बांधता है। ऊष्मायन के बाद स्लाइड को धोया जाता है।

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चरण 2:

एंटी-खरगोश इम्युनोग्लोबुलिन (लिंक एंटीबॉडी कहा जाता है) स्लाइड पर गिरा दिया जाता है।

मैं। यदि पहला खरगोश एंटीबॉडी स्लाइड में होता है (एंटीजन से बंधा हुआ) तो एंटी-खरगोश इम्युनोग्लोबुलिन खरगोश एंटीबॉडी से बांधता है। ऊष्मायन के बाद स्लाइड को धोया जाता है।

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चरण 3:

पेरोक्सीडेज के लिए खरगोश एंटीबॉडीज से मिलकर एक इम्यून कॉम्प्लेक्स, पेरोक्सीडेज के साथ मिलकर गिरा दिया जाता है। यह खरगोश एंटीबॉडी अपने एफसी क्षेत्र के माध्यम से एंटी-खरगोश इम्युनोग्लोबिन (लिंक एंटीबॉडी-चरण 2) को बांध देगा। ऊष्मायन के बाद स्लाइड को धोया जाता है।

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अंत में, पेरोक्सीडेज सब्सट्रेट जोड़ा जाता है। सब्सट्रेट पेरोक्सीडेस के साथ प्रतिक्रिया करेगा जिसके परिणामस्वरूप रंगीन उत्पाद बनता है जो माइक्रोस्कोप के तहत देखा जाता है।

मैं। ऊतक पर रंगीन उत्पाद की उपस्थिति संबंधित प्रतिजन की उपस्थिति को इंगित करती है।

ii। स्लाइड पर रंगीन उत्पाद की अनुपस्थिति इंगित करती है कि प्रश्न में प्रतिजन ऊतक में अनुपस्थित है।